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LightShift™ 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒

Thermo Scientific LightShift 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒是一種非常可靠、靈敏的電泳遷移率變動(dòng)實(shí)驗(yàn) (EMSA) 系統(tǒng)，用于鑒定和表征蛋白-DNA 結(jié)合相互作用。該試劑盒包括用于設(shè)置和定制 DNA 結(jié)合反應(yīng)的試劑、用于檢測(cè)試劑盒系統(tǒng)的一組 DNA 和蛋白提取物、用于生物su標(biāo)記 DNA 靶標(biāo)的穩(wěn)定鏈霉su親和素-HRP 偶聯(lián)物以及用于檢測(cè)的一種極其靈敏的化學(xué)發(fā)光底物模塊。

LightShift 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒的特點(diǎn)：

•非常適合檢測(cè)細(xì)胞核提取物中的低豐度蛋白
• 靈敏度超過(guò)放射性和di高辛方法
• 與先前為常用 DNA-蛋白相互作用建立的結(jié)合條件兼容
• 包括 EBNA 控制系統(tǒng)以幫助新用戶(hù)開(kāi)發(fā)工作檢測(cè)方法并了解用于確認(rèn)結(jié)合相互作用特異性的方法

LightShift EMSA 檢測(cè)的原理類(lèi)似于 Western 印跡。生物su末端標(biāo)記的雙螺旋 DNA 與細(xì)胞核提取物或純化因子一起孵育并在天然凝膠上電泳。然后快速（30 分鐘）將 DNA 轉(zhuǎn)印到陽(yáng)性尼龍膜上，進(jìn)行紫外交聯(lián)，用鏈霉su親和素-HRP 偶聯(lián)物進(jìn)行探測(cè)，并與底物一起孵育。可在一天內(nèi)完成從標(biāo)記到得出結(jié)果。

蛋白與 DNA 的相互作用是控制許多細(xì)胞過(guò)程的關(guān)鍵，包括 DNA 復(fù)制、重組和修復(fù)、轉(zhuǎn)錄和病毒組裝。研究基因調(diào)控和確定蛋白:DNA 相互作用的核心技術(shù)是電泳遷移率實(shí)驗(yàn) (EMSA)。

EMSA 技術(shù)基于以下觀(guān)察結(jié)果：在進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，蛋白:DNA 復(fù)合物的遷移速度比無(wú) DNA 分子慢。因?yàn)?DNA 遷移率會(huì)根據(jù)蛋白結(jié)合率發(fā)生偏移或速度減慢，因此，該實(shí)驗(yàn)也被稱(chēng)為凝膠偏移或凝膠延遲實(shí)驗(yàn)。直至 EMSA 蛋白:DNA 相互作用主要通過(guò)硝酸纖維素過(guò)濾柱結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行研究。

進(jìn)行試驗(yàn)所需的全部是純化的 DNA 靶標(biāo)，該靶標(biāo)已用生物su、待測(cè)蛋白提取物、尼龍膜和堿性電泳設(shè)備進(jìn)行末端標(biāo)記。DNA 靶標(biāo)可以在合成時(shí)加上 5' 或 3' 生物su標(biāo)記，或者在合成后使用 Thermo Scientific 生物su 3' 末端 DNA 標(biāo)記試劑盒（產(chǎn)品編號(hào) 89818）進(jìn)行標(biāo)記。細(xì)胞核、細(xì)胞溶質(zhì)或全細(xì)胞蛋白提取物可以通過(guò)多種方法獲得，包括 Thermo Scientific NE-PER 核和細(xì)胞質(zhì)提取試劑盒（產(chǎn)品編號(hào) 78833）。

LightShift™ 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒