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Thermo Pierce™ 細胞表面蛋白分離試劑盒

Thermo Scientific 細胞表面蛋白分離試劑盒是一整套試劑，用于對哺乳動物細胞蛋白進行選擇性生wu素化，并隨后進行純化，以排除細胞內(nèi)蛋白。

細胞表面蛋白分離試劑盒的特點：

•分離細胞表面蛋白—降低總細胞蛋白復(fù)雜性
•高效回收標記蛋白—通過可裂解生wu素，可幾乎回收分離的細胞表面蛋白
•便利—一個試劑盒中提供了所有試劑以及細胞表面膜蛋白標記、細胞裂解和純化的完整說明
•Western 印跡應(yīng)用—在 SDS-PAGE 緩沖液中回收的蛋白可直接上樣至聚丙烯酰胺凝膠
•穩(wěn)健的系統(tǒng)—方案設(shè)計用于多種細胞系，包括 NIH 3T3、HeLa、C6 和 A431

該試劑盒可高效標記具有可獲取賴氨酸殘基和充分細胞外暴露的蛋白。分離程序使用不可透過細胞的可裂解生wu素化試劑（Sulfo-NHS-SS-生wu素）來標記完整貼壁或懸浮細胞表面的蛋白上暴露的伯胺。之后收獲并水解經(jīng)處理的細胞，并使用 Thermo Scientific NeutrAvidin 瓊脂糖樹脂對標記的表面蛋白進行親和純化。分離出的細胞表面蛋白含一個原來標記伯胺、但不再生wu素化（生wu素保持連結(jié)至樹脂）的小型、非反應(yīng)標記。該試劑盒含足以進行八次實驗的試劑，每次實驗涉及裝有融合細胞的四個 T75 瓶。

細胞表面蛋白分離試劑盒已成功用于標記和純化細胞表面蛋白。在一次實驗中，使用或不使用 Sulfo-NHS-SS-生wu素處理 HeLa 細胞，并根據(jù)試劑盒程序?qū)毎M行處理。通過 Western 印跡分析收集的組分，包括洗脫、流過物和洗脫后凝膠。在用生wu素標記處理的細胞的洗脫組分中鑒定出四種細胞表面蛋白。這些蛋白包括表皮生長因子受體 (EGFR)、胰島素樣生長因子-1 受體 β IGF (IGF-1β)、整合素 1 和整合素 5。與之形成鮮明對比的是，在未標記細胞的洗脫組分中未鑒定出這些蛋白；未標記蛋白僅在流過物中發(fā)現(xiàn)。此外，還在來自標記細胞的流過物組分中鑒定出一些細胞表面蛋白。由于空間位阻，這些蛋白很可能未被標記。洗脫后凝膠組分中存在的已捕獲蛋白量可忽略不計，表明已捕獲蛋白回收率將近 。在所有檢測樣品的洗脫組分中檢測到了痕量熱休克蛋白 90 (Hsp90)，表明細胞表面與細胞內(nèi)蛋白標記具有特異性。

Thermo Pierce™ 細胞表面蛋白分離試劑盒